安捷倫（Agilent ）自 1999 年從惠普公司分離出來成為獨立的公司。自那時起，安捷倫公司先后榮獲了數(shù)百個創(chuàng)新獎項，并且

獲得了比獎項更多的發(fā)明zl。

    安捷倫（Agilent ）在生命科學(xué)、診斷和應(yīng)用化學(xué)市場領(lǐng)域市場份額巨大。安捷倫為全球多個國家的實驗室提供儀器、服務(wù)、

消耗品、應(yīng)用與專業(yè)知識。

    15 年前安捷倫推出了業(yè)界首款表面多孔顆粒填料色譜柱 Poroshell 300，用于大分子物質(zhì)的分析。

    Agilent Poroshell 色譜柱是快速分離蛋白質(zhì)和多肽的理想選擇，其獨特的填料支持采用高流速，同時保持尖銳且高效的峰。肽和

蛋白質(zhì)的分離一般較慢，以降低這些慢擴散分析物的潛在峰展寬。但 Poroshell 色譜柱采用獨特的填料，這種填料通過在實心硅膠

內(nèi)核上涂覆一層多孔硅膠而制成。這減少了蛋白質(zhì)的擴散距離，可使分子量高達(dá) 500–1000 kDa 的多肽和蛋白質(zhì)實現(xiàn)快速 HPLC 

分離。在使用 TFA 和甲酸流動相時，Poroshell 300SB C18、C8、C3 和 300Extend 色譜柱具有優(yōu)異的穩(wěn)定性和選擇性。

Poroshell 300Extend C18 色譜柱可在不同的 pH 條件下使用，以實現(xiàn)特殊分離，并提供更多的選擇性。


●使用表面多孔顆粒填料進(jìn)行生物分子的 UHPLC 分離

●300 ? 孔徑在分離蛋白質(zhì)（較高 1000 kDa）和單克隆抗體時具有高柱效和高回收率

●在低 pH 條件下使用 Poroshell 300SB，高 pH 條件下使用 300Extend-C18，可以獲得長柱壽命

●通過四種不同的鍵合相（300SB-C18、300SB-C8、300SB-C3 和 300Extend-C18）優(yōu)化回收率和選擇性



目前 Poroshell 300  Extend C18 生產(chǎn)在售的貨號有：


670750-902          Poroshell Extend 300 C18, 2.1 x 75 mm, 5 μm   

671750-902          Poroshell Extend 300 C18, 1.0 x 75 mm, 5 μm  微徑柱

    ZORBAX 微徑柱（1.0 mm 內(nèi)徑）

? 對于樣品量很少的分析具有高靈敏度

? 與 LC/MS 接口兼容

? 各種各樣的鍵合相

    當(dāng)樣品量有限時，Agilent ZORBAX 微徑（1.0 mm 內(nèi)徑）色譜柱常常是很好的選擇。與 2.1 mm內(nèi)徑色譜柱相比，如果使用

相同的樣品量，這種色譜柱可將檢測限提高 5 倍。靈敏度的增加可能是至關(guān)重要的。微徑色譜柱使用低流速（通常約50 μL/min）

所以，對于諸如質(zhì)譜以及毛細(xì)液相色譜系統(tǒng)這樣需要低流速的檢測器來說，這些色譜柱是理想的選擇。

      微徑色譜柱最適合在專用微徑柱和為使用微徑柱而改進(jìn)的 HPLC 系統(tǒng)上使用。有各種鍵合相可在高達(dá) 400 bar 時使用，包括 

StableBond SB-C18、SB-C8、300SB-C18；Eclipse XDB-C18和 XDB-C8；Bonus RP、Extend C-18；以及 Poroshell 柱?，F(xiàn)在還提

供保護(hù)柱，具有可調(diào)深度的管接頭，從而保證每次連接時死體積都是撥。

反相色譜柱和流動相指南：
【孔徑的選擇】
如果溶質(zhì)分子量小于5000，則選擇小孔徑(60-120 ?) 填料柱，否則，應(yīng)選用300 ? 孔徑的填料柱。
【粒徑的選擇】
高效液相柱填料粒徑一般是5 μm，現(xiàn)在方法開發(fā)主要采用3.5 μm 及更小的色譜柱。如果需要進(jìn)行快速分析或更高分離度分析，可以使用1.8 μm 和2-3 μm 粒徑的填料。
采用這些填料的色譜柱越短，越可能獲得更快速的高分離度分離，1.8 μm 填料粒徑具有較高的柱效，2.7 μm 表面多孔填料能提供類似結(jié)果。
選擇1.8、2.7、3.5 和5 μm 填料粒徑，從最小填料粒徑開始進(jìn)行HPLC 或UHPLC 分析道道400 bar、600 bar 或1200 bar，以獲得z好的結(jié)果。
【色譜柱柱型】
在過去的幾年中，選擇z佳色譜柱規(guī)格進(jìn)行方法開發(fā)已發(fā)生巨大變化?，F(xiàn)在更常用的是3.0 mm 內(nèi)徑或2.1 mm 內(nèi)徑柱，而不是4.6 mm 內(nèi)徑柱，因為其溶劑用量較少，而且能與MS 檢測器兼容。較短的50、75 和100 mm 長的色譜柱可能是良好的起始選擇，只有當(dāng)需要更高分離度或使用3.5 和5 μm 粒徑色譜柱時才使用長柱。

硅膠類型和鍵合相：
【基本材料】
液相柱的基本材料采用較高純度的全多孔硅膠填料，與大多數(shù)安捷倫ZORBAX 柱中使用的填料一樣。當(dāng)然也有更多選擇，包括在高pH 下穩(wěn)定的聚合物材料（常用于PLRP-S 柱）和表面多孔硅膠填料（Poroshell 120 柱使用）。高純度B 型硅膠，包括ZORBAX Eclipse Plus 中使用的ZORBAX Rx-Sil 和表面多孔Poroshell 120，為大多數(shù)方法的首選。
A 型硅膠，如ZORBAX SIL，用于早期的ZORBAX 柱，仍在生產(chǎn)并為許多方法所用。

【鍵合相】
鍵合相的首選材料為C18 或C8，建議起始色譜柱選擇Eclipse Plus C18 或Poroshell 120 EC-C18。這兩種色譜柱能提供出色的峰形，能在pH 2-9 范圍內(nèi)使用，并適用最通用的LC 和LC/MS 流動相。如果目標(biāo)樣品溶質(zhì)在這類色譜柱上沒有完全分離，CN 和苯基柱道道包括苯基、苯基己基和二苯基柱道道可以提供與直鏈烷烴顯著不同的選擇性，而對分離產(chǎn)生影響。

【pH 值和流動相】
對于反相系統(tǒng)流動相的選擇，應(yīng)首先考慮有機改性劑的選擇。乙腈是最常用的有機改性劑。使用含乙腈、甲醇和四氫呋喃(THF) 流動相的選擇性和樣品保留有明顯區(qū)別。這些溶劑對樣品的溶解性可能不同，需要使用指定的溶劑。某些改性劑不能在某些波長下進(jìn)行UV 檢測（如甲醇在200 nm 下）。

色譜柱的保護(hù)
保護(hù)柱和在線過濾器是經(jīng)濟而易用的色譜柱保護(hù)工具。他們能夠改善結(jié)果的準(zhǔn)確度，在提高可靠性的同時延長分析柱壽命。填充任何填料的所有規(guī)格的色譜柱都可以使用色譜柱保護(hù)。

【保護(hù)柱】
保護(hù)柱保護(hù)色譜柱，z大限度地減少污染對柱效的影響。對于大多數(shù)類型的ZORBAX 填料，都有預(yù)填充的ZORBAX 卡套柱保護(hù)柱芯。保護(hù)柱芯有不同的內(nèi)徑，為各種類型的色譜柱提供高效保護(hù)。保護(hù)柱也可以用于許多非Zorbax 色譜柱?？捎玫谋Ｗo(hù)柱可參見各自的色譜柱列表。

【低容量在線過濾器】
建議每個色譜柱都要用低容量在線過濾芯，保護(hù)色譜柱不受顆粒物質(zhì)污染。在線過濾器阻擋了顆粒（來自未過濾的樣品和/或洗脫液）使其不堵塞分析柱篩板，延長了分析柱的壽命。使用保護(hù)柱可能影響小體積色譜柱和/或粒徑非常小的填料色譜柱的柱效。對這類色譜柱，強烈建議使用低體積在線過濾器。為了獲得較高柱效，應(yīng)使用小的0.5 μm 篩板。

【可更換色譜柱入口篩板】
如果HPLC 色譜柱在沒有在線預(yù)柱過濾器安裝保護(hù)柱的情況下使用，分析柱可能出現(xiàn)堵塞。目前所用的高效填充工藝不允許更換色譜柱的篩板。如果更換篩板，可能會影響柱效。對于2.1、3.0、4.6 和9.4 mm 的標(biāo)準(zhǔn)ZORBAX 填充柱，我們提供PEEK 密封的可更換篩板。

標(biāo)準(zhǔn)硬件色譜柱的可更換入口篩板（PEEK 密封）
   說明                直徑(mm)       單位          部件號          
窄徑柱                2.1                10/包          280959-904
溶劑節(jié)省柱         3.0                各1 個        280959-006
分析柱                4.6                10/包          280959-905
半制備柱             9.4                各1 個        280959-001